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    高效液相色譜法測定食醋中的苯甲酸和山梨酸
    發表日期:2018/5/27 20:37:07 瀏覽次數:734

    摘要:研究了一種用蒸餾法提取, 高效液相色譜法測定食醋中苯甲酸和山梨酸的方法。用蒸餾法提取食醋中的苯甲酸和山梨酸。收集蒸餾液直接進行液相色譜分析。使用的色譜柱為 C 柱, 流動相為甲醇 - 乙腈 - 5 mmol/ L 檸檬酸緩沖溶液(體積比為10:20:70), 檢測波長為 230 nm。苯甲酸和山梨酸標準溶液在 0.25mg/ L~100 mg/ L 內線性良好, 其線性相關系數分別為 0.9999 和 0.9998, 加標回收率為 91.0 % ~95.2 % , 測量結果的相對標準偏差為2.46 %~3.45 % 。該方法用于測定食醋樣品中的苯甲酸、山梨酸, 檢測下限均為 0.5 mg/ L。苯甲酸和山梨酸作為防腐劑, 具有抑制細菌生長和繁殖的作用, 被廣泛地應用于食品工業, 但他們的過量攝用可對人們的健康造成損害 。因此食醋中苯甲酸和山梨酸的檢測具有十分重要的意義。檢測苯甲酸和山梨酸一般采用氣相色譜法和液相色譜法。氣相色譜法樣品處理工作量大, 試劑毒性強,且因處理步驟繁瑣, 極易造成回收率偏低, 對檢驗人員技巧要求高。而國標中液相色譜法樣品處理方法只適用于飲料與預調酒等基質簡單的樣品, 檢測食醋中的苯甲酸和山梨酸時存在干擾嚴重, 污染色譜柱的問題。為了滿足分析工作的需要, 筆者在大量實驗的基礎上, 建立了一種醇沉去除大分子雜質, 快速測定苯甲酸和山梨酸的新方法。


    1 實驗方法

    1.1 主要儀器與試劑

    高效液相色譜儀: 安捷倫 1100 高效液相色譜

    儀, 二極管陣列檢測器, 美國安捷倫公司;

    檸檬酸緩沖溶液: 5mmol/ L, pH=4.0;

    酒石酸溶液: 0.15mol/ L;

    苯甲酸和山梨酸標準品: 成都圭一公司;

    硅酮樹脂: 食品添加劑;

    甲醇、乙腈: 色譜純; 食醋樣品: 鎮江陳醋;

    所用其它試劑均為分析純;

    實驗用水為蒸餾水。

    1.2 色譜分析條件

    色譜柱: Zorbax SB C18(4.6 mm×250 mm X 5/um);

    流動相: 甲醇 0.05 mol/ L 磷酸二氫鈉溶液(磷酸調 pH = 3.5)(體積比 35∶65);

    流速: 1.0 mL/ min;

    波長: 230 nm;

    進樣量: 10/ μL。

    1.3 樣品溶液的制備

    準確量取食醋樣品 50 mL, 加入 40 g 氯化鈉、5 mL 0.15mol/ L酒石酸溶液和一滴硅酮樹脂, 用水定容到 200 mL, 混勻后進行蒸餾, 收集約 90 mL 餾出液, 定容于 100 mL 容量瓶中。用孔徑 0.45 μm的過濾膜過濾, 制得樣品溶液, 待測。


    2 結果與討論

    2.1 樣品處理方法

    食醋由糧食發酵制得, 成分復雜, 采用國家標準直接稀釋進樣的方法測定其中苯甲酸、山梨酸的含量, 不但干擾較多, 而且對色譜柱有較大的損害。山梨酸、苯甲酸極易隨水蒸氣揮發, 利用這一性質, 采用蒸餾的方法將食醋中的山梨酸、苯甲酸提取出來, 無須進一步凈化即可消除干擾, 檢測結果理想。

    2.2 氯化鈉的加入量

    蒸餾過程中需加入氯化鈉, 氯化鈉的加入量對檢測結果有一定的的影響。以添加氯化鈉的質量為橫坐標, 苯甲酸、山梨酸的回收率為縱坐標作折線圖, 從而得出氯化鈉最佳添加量為 40 g。

    2.3 蒸餾速度

    蒸餾速度對于檢測結果的準確性有一定的影響, 在蒸餾過程中, 加熱速度不能過大, 否則回收率會較低。而加熱過慢則分析時間延長。本實驗選擇蒸餾速度為 3 mL/ min。

    2.4 流動相的選擇

    苯甲酸和山梨酸均為有機弱酸, 在水溶液中存在著解離平衡, 解離程度受溶液 pH 值控制。提高H+濃度可抑制有機酸的解離, 從而增加有機酸在反相固定相上的保留, 改善分離效果。本實驗嘗試用甲醇 0.05mol/ LNaH2PO4緩沖溶液作為流動相體系,并用濃磷酸調節 NaH2P04緩沖溶液的 pH 值發現,當 pH 值在 3.0~6.0 范圍內, 被測物保留時間隨 pH增大而減小; 且隨著流動相中甲醇含量增加, 被測物的保留時間下降, 這可能與有機酸疏水基團與固定相的相互作用減弱有關。綜合上述各種因素, 將甲醇與緩沖液體積比調為 35∶65, pH 值調為 3.5時, 苯甲酸和山梨酸可與干擾峰完全分離, 保留時間適當, 分離度較好。

    2.5 標準曲線及檢測限

    將配置好的標準系列溶液在擬定的色譜條件下進樣測定, 以質量濃度為橫坐標, 峰面積 A 為縱坐標繪制標準曲線。

    2.6 加標回收率及精密度

    分別添加低、中、高三種濃度混合標準溶液,按上述前處理方法處理樣品后, 同濃度平行三份當日進樣 6 次, 計算日內 RSD 標準偏差; 一周內測 6次, 計算日間 RSD。


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